Ono telah menjadi aktivis untuk keamanan dan hak asasi manusia sejak tahun 1960-an. Selepas perkahwinan mereka, beliau dan Lennon mengadakan "Bed-In for Peace" dalam suite bulan madu mereka di Hotel Hilton Amsterdam pada Mac 1969, di mana pasangan pengantin baru dalam baju tidur menjemput pelawat dan ahli-ahli akhbar, tidak sabar-sabar untuk bercakap tentang dan menggalakkan keamanan dunia. Satu lagi Bed-In selama dua bulan kemudian di Queen Elizabeth Fairmont di Montreal menyebabkan rakaman single pertama mereka, "Give Peace A Chance", hasil 20 teratas untuk Plastic Ono Band yang baru ditubuhkan. Persembahan/demonstrasi yang lain dengan John termasuk lelaran "bagism," dengan John daripada Bag Pieces yang beliau perkenalkan pada awal 1960-an, yang menggalakkan sikap tidak menghiraukan untuk penampilan fizikal dalam menghakimi orang lain. Pada Disember 1969, kedua-dua mereka terus menyebarkan mesej damai mereka dengan papan iklan di 12 bandar-bandar utama dunia membaca "WAR IS OVER! If You Want It - Happy Christmas from John & Yoko."

Pada 1970-an, Ono dan Lennon menjadi rapat dengan banyak radikal, pemimpin saingan, termasuk Bobby Seale, Abbie Hoffman, Jerry Rubin, Michael X, John Sinclair (yang bagi perhimpunan di Michigan mereka terbang untuk menyanyikan lagu Lennon "Free John Sinclair" yang berkesan mengeluarkan penyair dari penjara), Angela Davis, dan pemuzik jalanan David Peel. Pengarang Friend and Sexual Politics Kate Millett telah berkata Ono menghilhamkan aktivisme beliau. Ono dan Lennon muncul di The Mike Douglas Show, mengambil alih tugas hosting selama seminggu. Ono bercakap panjang lebar mengenai kejahatan perkauman dan seksisme. Beliau kekal lantang bersuara untuk menyokong feminisme beliau, dan secara terbuka pahit mengenai perkauman yang dia telah mengalami daripada peminat rock, terutama di UK. Penerimaan beliau dalam media UK yang tidak lebih baik. Sebagai contoh, satu artikel Esquire tempoh yang bertajuk "John Rennon's Excrusive Gloupie" dan menampilkan kartun David Levine.

Pada tahun 1999, selepas pembunuhan beramai-ramai Columbine High School, Ono dibayar untuk papan iklan yang akan diletakkan di Bandar New York dan Los Angeles yang melahirkan imej cermin mata darah terpercik Lennon. Pada awal tahun 2002 beliau telah membayar kira-kira £ 150,000 ($ 213,375) untuk papan iklan di Piccadilly Circus dengan garis dari Imagine Lennon: ". Bayangkan semua orang masih hari ini" Pada tahun yang sama, beliau merasmikan anugerah keamanan, LennonOno Grant for Peace, dengan memberikan hadiah wang $ 50,000 (£ 31,900) asalnya kepada artis hidup "di kawasan-kawasan konflik". Anugerah ini diberikan setiap dua tahun sempena menyalakan Imagine Peace Tower, dan pertama kali diberikan kepada artis Israel dan Palestin. sejak program telah berkembang untuk memasukkan penulis, seperti Michael Pollan dan Alice Walker, aktivis seperti Vandana Shiva dan Pussy Riot, organisasi seperti Pusat Hak Perlembagaan New York, bahkan seluruh negara (Iceland).

Pada Hari Valentine 2003, pada malam pencerobohan Iraq oleh Amerika Syarikat dan UK, Ono mendengar tentang pasangan, Andrew dan Christine Gale, yang memegang cinta dalam bantahan di dalam bilik tidur kecil mereka dalam Addingham, Yorkshire Barat. Beliau menelefon mereka dan berkata, "Ia baik untuk bercakap dengan anda. Kami menyokong anda. Kami semua adik-beradik bersama-sama." Pasangan itu berkata bahawa lagu-lagu seperti "Give Peace a Chance" dan "Imagine" mengilhamkan bantahan mereka. Pada tahun 2004, Ono menerbitkan semula lagu beliau "Everyman ..... Everywoman ....." untuk menyokong perkahwinan sejenis, mengeluarkan adunan semula yang termasuk "Every Man Has a Man Who Loves Him" dan "Every Woman Has a Woman Who Loves Her"

Pada bulan Ogos 2011, beliau membuat filem dokumentari mengenai Bed Bed-Ins Peace didapati secara percuma di YouTube, dan sebagai sebahagian daripada laman web beliau "Imagine Peace". Pada bulan Januari 2013, Ono berusia 79 tahun, bersama-sama dengan Sean Lennon dan Susan Sarandon, turun ke luar bandar Pennsylvania dalam bas di bawah panji-panji Artists Against Fracking dan Sean mencipta dengan Mark Ruffalo pada bulan Ogos 2012 untuk memprotes keretakan hidraulik. Ahli-ahli kumpulan yang lain termasuk Lady Gaga dan Alec Baldwin.

Ono mempromosikan seni beliau, dan berkongsi mesej inspirasi dan imej, melalui kehadiran Twitter, Instagram dan Facebook yang kukuh dan aktif. Pada bulan April 2014 pengikut Twitter beliau mencapai 4.69 juta, manakala pengikut Instagram beliau melebihi 99,000. Tweet beliau adalah puisi pengajaran pendek, komen di media dan politik, dan nota mengenai persembahan.